Somogyi-Nelson法による還元糖の定量‐マイクロチューブスケール

  1. マイクロチューブ（1.5mLもしくは2mL）を試料の数だけ準備し，ラベリングする。
  2. 反応溶液250μLをマイクロチューブに分注する。
  3. ソモギ銅試薬250μLを添加し、ビー玉をふたにして15分間110℃のヒートブロックに置く。
    1. ビー玉でふたをするのは蒸発した液が冷えて中に戻るようにするため。
    2. 湯浴中にチューブを立てるのでもよい。ネジ口試験管や15ml遠沈管であれば試験管立てごと湯浴に立てることもできる。
    3. 試薬を入れるときに手袋をする。
  4. ネルソン試薬250μLを添加したのち，脱イオン水500μLを加える。
    1. 試薬を入れるときに手袋をする（ネルソン試薬はヒ素と硫酸を含む）。
  5. シリンジフィルター（0.22μm）でろ過する。
    1. 沈殿により吸光度データが不安定になるのを防ぐ目的。
    2. マイクロチューブから2.5mlシリンジで反応溶液をとり，フィルターをつけ，セミミクロセルに排出する。
    3. シリンジは数本を水で洗いながら使用すればよい。
    4. 沈殿の除去は遠心でもよいが、操作が難しい。
  6. 分光光度計で吸光度520nm,660nmを測定する。
    1. 波長520nmは緑色である。
    2. 波長660nmは深紅色である。直観的ではないが感度が良い。